Som et højpræcisionsinstrument kan HPLC let føre til nogle besværlige små problemer, hvis det ikke betjenes på den korrekte måde under brug.Et af de mest almindelige problemer er problemet med kolonnekomprimering.Sådan fejlfinder du hurtigt en defekt kromatograf.HPLC-systemet består hovedsageligt af en reservoirflaske, en pumpe, en injektor, en kolonne, et kolonnetemperaturkammer, en detektor og et databehandlingssystem.For hele systemet er søjlerne, pumperne og detektorerne nøglekomponenterne og de vigtigste steder, der er udsat for problemer.
Nøglen til kolonnetryk er det område, der kræver nøje opmærksomhed, når du bruger HPLC.Søjletrykkets stabilitet er tæt forbundet med kromatografisk topform, søjleeffektivitet, separationseffektivitet og retentionstid.Søjletrykstabilitet betyder ikke, at trykværdien er stabil ved en stabil værdi, men derimod at trykudsvingsområdet er mellem 345kPa eller 50PSI (hvilket giver mulighed for brug af gradienteluering, når kolonnetrykket er stabilt og langsomt skiftende).For højt eller for lavt tryk er et søjletrykproblem.
De mest tilbøjelige til HPLC-fejl og løsninger
1, højtryk er det mest almindelige problem ved brug af HPLC.Det betyder en pludselig stigning i trykket.Generelt er der følgende årsager: (1) Generelt skyldes dette blokering af flowkanalen.På dette tidspunkt bør vi undersøge det stykkevis.en.Afbryd først indløbet til vakuumpumpen.På dette tidspunkt blev PEEK-røret fyldt med væske, så PEEK-røret var mindre end opløsningsmiddelflasken for at se, om væsken dryppede efter ønske.Hvis væsken ikke drypper eller drypper langsomt, er opløsningsmiddelfilterhovedet blokeret.Behandling: Læg i blød i 30% salpetersyre i en halv time og skyl med ultrarent vand.Hvis væsken drypper tilfældigt, er opløsningsmiddelfilterhovedet normalt og bliver kontrolleret;b.Åbn udluftningsventilen, så den mobile fase ikke passerer gennem kolonnen, og hvis trykket ikke reduceres væsentligt, blokeres det hvide filterhoved.Behandling: Filtrerede whiteheads blev fjernet og sonikeret med 10% isopropanol i en halv time.Forudsat at trykket falder til under 100PSI, er det filtrerede hvide hoved normalt og bliver tjekket;c.Fjern udgangsenden af kolonnen, hvis trykket ikke falder, er kolonnen blokeret.Behandling: Hvis det er en buffersaltblokering, skylles 95% indtil trykket er normalt.Hvis obstruktionen er forårsaget af noget mere højt konserveret materiale, bør en stærkere strømning end den nuværende mobile fase bruges til at skynde sig mod normalt tryk.Hvis det langsigtede rengøringstryk ikke falder i henhold til ovenstående metode, kan søjlens indløb og udløb tværtimod anses for at være forbundet med instrumentet, og søjlen kan rengøres med den mobile fase.På dette tidspunkt, hvis kolonnetrykket stadig ikke er reduceret, kan søjleindgangssigtepladen kun udskiftes, men når først operationen ikke er god, er det let at føre til reduktion af kolonneeffekten, så prøv at bruge mindre.Ved vanskelige problemer kan kolonneudskiftning overvejes.
(2) Forkert flowhastighedsindstilling: Korrekt flowhastighed kan nulstilles.
(3) Forkert strømningsforhold: Viskositetsindekset for forskellige andele af strømme er forskelligt, og det tilsvarende systemtryk for strømmen med højere viskositet er også større.Hvis det er muligt, kan opløsningsmidler med lavere viskositet udskiftes eller genindstilles og klargøres.
(4) Systemtryk nul drift: Juster nulpunktet for væskeniveausensoren.
2, trykket er for lavt (1) er normalt forårsaget af systemlækage.Hvad skal du gøre: Find hver forbindelse, især grænsefladen i begge ender af søjlen, og stram lækageområdet.Fjern stolpen, og stram eller beklæd PTFE-filmen med passende kraft.
(2) Gassen kommer ind i pumpen, men trykket er normalt ustabilt på dette tidspunkt, højt og lavt.Mere alvorligt vil pumpen ikke være i stand til at absorbere væsken.Behandlingsmetode: Åbn renseventilen og rengør med en flowhastighed på 3~5ml/min.Hvis ikke, blev luftbobler aspireret ved udstødningsventilen ved hjælp af et dedikeret nåleslange.
(3) Ingen mobil fase udstrømning: Kontroller, om der er en mobil fase i reservoirflasken, om vasken er nedsænket i den mobile fase, og om pumpen kører.
(4) Referenceventilen er ikke lukket: Referenceventilen er lukket efter deceleration.Det går normalt ned til 0,1.~ 0,2mL/min efter lukning af referenceventilen.
Resumé:
I dette papir analyseres kun almindelige problemer i væskekromatografi.Selvfølgelig vil vi i vores praktiske anvendelse støde på flere andre problemer.Ved fejlhåndtering bør vi følge følgende principper: kun ændre én faktor ad gangen for at bestemme forholdet mellem den hypotetiske faktor og problemet;Generelt, når vi udskifter dele til fejlfinding, bør vi være opmærksomme på at sætte de afmonterede intakte dele tilbage på plads for at forhindre spild;At danne en god rekordvane er nøglen til succes med fejlhåndtering.Som konklusion, når du bruger HPLC, er det vigtigt at være opmærksom på prøveforbehandling og korrekt drift og vedligeholdelse af udstyret.
Indlægstid: 18. september 2023