Rekombinante proteinantigener har ofte flere forskellige epitoper, hvoraf nogle er sekvensepitoper og nogle er strukturelle epitoper.Polyklonale antistoffer opnået ved at immunisere dyr med denaturerede antigener er blandinger af antistoffer, der er specifikke for individuelle epitoper og kan generelt anvendes til at påvise naturlige strukturer eller denaturerede målproteiner.En sidegevinst ved at bruge denaturerede proteiner som immunogener er, at denaturerede proteiner har tendens til at være mere immunogene og kan stimulere et stærkt immunrespons hos dyr.
Ekspressionssystemet for Escherichia coli vælges sædvanligvis til antigene formål, fordi det er det dyreste system i form af tid og penge.For at forbedre muligheden for målproteinekspression og bekvemmeligheden ved oprensning udtrykkes nogle gange kun et lille fragment af målproteinet, såsom et specifikt domæne.
Den tredimensionelle struktur af proteiner
Et proteins specifikke domæne
Hvis formålet med antistofpræparation udelukkende er til wb-detektion, er det økonomisk og hurtigt at anvende syntetisk lille peptid som antigen, men der er risiko for svag immunogenicitet eller ikke-regenicitet på grund af uhensigtsmæssig udvælgelse af peptidsegment.Da antistofpræparation kræver en lang periode, udvælges to eller tre forskellige peptidsegmenter ofte til at fremstille antistoffer ved hjælp af polypeptidantigen for at sikre forsøgets succesrate.
Renheden af polypeptidantigen til immunisering skal være større end 80 %.Selvom en højere renhed teoretisk kan opnå antistoffer med bedre specificitet, producerer dyr i praksis altid et stort antal ikke-specifikke antistoffer, hvilket maskerer fordelene ved antigenrenhed.
Derudover skal fremstillingen af antistoffer fra små peptider tværbindes til det passende bæreantigen for at øge dets immunogenicitet.To almindelige antigene bærere er KLH og BSA.
Indlægstid: 23-03-2023