Rekombinante proteinantigener har ofte flere forskellige epitoper, hvoraf nogle er sekvensepitoper, og nogle er strukturelle epitoper. Polyklonale antistoffer opnået ved immunisering af dyr med denaturerede antigener er blandinger af antistoffer, der er specifikke for individuelle epitoper og kan bruges generelt til at detektere naturlige strukturer eller denaturerede målproteiner. En sidefordel ved at bruge denaturerede proteiner som immunogener er, at denaturerede proteiner har en tendens til at være mere immunogene og kan stimulere en stærk immunrespons hos dyr.
Ekspressionssystemet for Escherichia coli vælges normalt til antigene formål, fordi det er det dyreste system med hensyn til tid og penge. For at forbedre muligheden for målproteinekspression og nemhedsgraden af oprensning udtrykkes undertiden kun et lille fragment af målproteinet, såsom et specifikt domæne,.
Den tredimensionelle struktur af proteiner
Det specifikke domæne af et protein
Hvis formålet med antistofpræparation udelukkende er til WB-detektion, er det økonomisk og hurtigt at bruge syntetisk lille peptid som antigen, men der er risiko for svag immunogenicitet eller ikke-regenicitet på grund af upassende udvælgelse af peptidsegment. Da antistofpræparat kræver en lang periode, vælges ofte to eller tre forskellige peptidsegmenter til at fremstille antistoffer ved anvendelse af polypeptidantigen for at sikre succesraten for eksperimentet.
Renheden af polypeptidantigen til immunisering kræves for at være større end 80%. Selvom en højere renhed teoretisk kan opnå antistoffer med bedre specificitet, producerer dyr i praksis altid et stort antal ikke-specifikke antistoffer, hvilket maskerer fordelene ved antigenrenhed.
Derudover skal fremstillingen af antistoffer fra små peptider være tværbundet til det relevante bærerantigen for at øge dets immunogenicitet. To almindelige antigene bærere er KLH og BSA.
Posttid: 2025-07-03