De mest tilbøjelige til HPLC -fejl og løsninger

Som et højpræcisionsinstrument kan HPLC let føre til nogle besværlige små problemer, hvis det ikke drives på den rigtige måde under brug. Et af de mest almindelige problemer er kolonnekomprimeringsproblemet. Sådan fejlfindes hurtigt en defekt kromatograf. HPLC -systemet består hovedsageligt af en reservoirflaske, en pumpe, en injektor, en søjle, et søjletemperaturkammer, en detektor og et databehandlingssystem. For hele systemet er søjler, pumper og detektorer de vigtigste komponenter og de vigtigste placeringer, der er tilbøjelige til problemer.

The key to column pressure is the area that needs close attention when using HPLC. Stabiliteten af ​​søjltrykket er tæt knyttet til kromatografisk topform, søjleeffektivitet, separationseffektivitet og tilbageholdelsestid. Kolonnestrykstabilitet betyder ikke, at trykværdien er stabil til en stabil værdi, men snarere at trykfluktuationsområdet er mellem 345 kpa eller 50psi (muliggør anvendelse af gradienteluering, når søjledrykket er stabilt og langsomt ændrer sig). For højt eller for lavt tryk er et søjltryksproblem.

De mest tilbøjelige til HPLC -fejl og løsninger

1, højt tryk er det mest almindelige problem i brugen af ​​HPLC. Dette betyder en pludselig stigning i pres. Generelt er der følgende grunde: (1) Generelt skyldes dette flowkanalblokering. På dette tidspunkt bør vi undersøge det stykkevis. en. Afskær først indløbet af vakuumpumpen. På dette tidspunkt var peek -røret fyldt med væske, så peek -røret var mindre end opløsningsmiddelflasken for at se, om væsken dryppede efter ønske. Hvis væsken ikke drypper eller drypper langsomt, blokeres opløsningsmiddelfilterhovedet. Behandling: Blødlægges 30% salpetersyre i en halv time og skylles med ultrapurvand. Hvis væsken drypper tilfældigt, er opløsningsmiddelfilterhovedet normalt og kontrolleres; b. Åbn rensningsventilen, så den mobile fase ikke passerer gennem søjlen, og hvis trykket ikke reduceres væsentligt, blokeres filterhvide hovedet. Behandling: Filtrerede hvidhoveder blev fjernet og sonikeret med 10% isopropanol i en halv time. Hvis man antager, at trykket falder under 100psi, er det filtrerede hvide hoved normalt og kontrolleres; c. Fjern udgangen af ​​kolonnen, hvis trykket ikke falder, er kolonnen blokeret. Behandling: Hvis det er en puffer saltblokering, skal du skylle 95%, indtil trykket er normalt. Hvis obstruktionen er forårsaget af noget mere stærkt konserveret materiale, skal en stærkere strøm end den nuværende mobilfase bruges til at skynde sig mod normalt tryk. Hvis det langsigtede rengøringstryk ikke falder i henhold til ovenstående metode, kan indløbet og udløbet af søjlen betragtes som tilsluttet instrumentet tværtimod, og kolonnen kan rengøres med den mobile fase. På dette tidspunkt, hvis kolonnetrykket stadig ikke reduceres, kan søjleindgangspladen kun udskiftes, men når operationen ikke er god, er det let at føre til reduktion af kolonneeffekten, så prøv at bruge mindre. For vanskelige problemer kan der overvejes kolonneudskiftning.

(2) Forkert strømningshastighed: Korrekt strømningshastighed kan nulstilles.

(3) Forkert flowforhold: Viskositetsindekset i forskellige andele af strømme er anderledes, og det tilsvarende systemtryk af strømmen med højere viskositet er også større. Hvis det er muligt, kan lavere viskositetsopløsningsmidler udskiftes eller genindstilles og forberedes.

(4) Systemtryk Zero Drift: Juster nul på væskeniveauføleren.

2, trykket er for lavt (1) er normalt forårsaget af systemlækage. Hvad skal man gøre: Find hver forbindelse, især grænsefladen i begge ender af søjlen, og spænd lækageområdet. Fjern indlægget, og spænd, eller linje PTFE -filmen med passende kraft.

(2) Gassen kommer ind i pumpen, men trykket er normalt ustabilt på dette tidspunkt, højt og lavt. Mere alvorligt vil pumpen ikke være i stand til at absorbere væsken. Behandlingsmetode: Åbn rengøringsventilen og rengør med en strømningshastighed på 3 ~ 5 ml/min. Hvis ikke, blev luftbobler aspireret ved udstødningsventilen under anvendelse af et dedikeret nålør.

(3) Ingen mobil faseudstrømning: Kontroller, om der er en mobil fase i reservoirflasken, om vasken er nedsænket i den mobile fase, og om pumpen kører.

(4) Referenceventilen er ikke lukket: Referenceventilen er lukket efter deceleration. Det går normalt ned til 0,1. ~ 0,2 ml/ min efter lukning af referenceventilen.

Oversigt:

I dette papir analyseres kun almindelige problemer i væskekromatografi. I vores praktiske anvendelse vil vi selvfølgelig støde på flere andre problemer. Ved fejlhåndtering skal vi følge følgende principper: ændrer kun en faktor ad gangen for at bestemme forholdet mellem den hypotetiske faktor og problemet; Generelt, når vi udskifter dele til fejlfinding, skal vi være opmærksomme på at sætte de demonterede intakte dele tilbage på plads for at forhindre affald; At danne en god rekordvaner er nøglen til succes med fejlhåndtering. Afslutningsvis, når man bruger HPLC, er det vigtigt at være opmærksom på prøveforbehandling og korrekt drift og vedligeholdelse af udstyret.